挑战
英国利兹大学分子细胞生物学学院的 Tomlinson 实验室在分子水平上研究蛋白功能。Darren Tomlinson 的研究团队对使用一种被称为 Affimer 的新型分子识别工具来研究蛋白功能。Affimer(也称 Adhiron)是一种通过约束两个随机环来进行分子识别的支架蛋白。它们可作为抗体的替代试剂用于诊断等应用中,以及用于探测靶蛋白的表面以识别与蛋白功能有关的关键域。他们的实验室提供针对许多类型分子的筛选服务,但他们的重点是使用 Affimer 支架蛋白来在分子层次理解蛋白功能。
为研究这些 Affimer,该团体需要一个能运行这些小规模筛选的易用系统。
解决方案
该团体选择 ImageXpress Pico 作为其他高内涵成像系统的一种实惠且简单易用的替代系统。
结果
该团体主要使用 ImageXpress Pico 来进行小规模筛选,从而了解靶向各种胞内蛋白的 Affimer 蛋白对靶蛋白下游信号转导通路的影响。参见图 1 中的示例,该示例显示了转染带有 GFP 标签的 Affimer(绿色)并经磷酸化 ERK(橙色)染色的小鼠胚胎成纤维细胞。实验证明靶向 Affimer 的蛋白会降低经 EGF 刺激的 pERK 表达。
该团体还使用 ImageXpress Pico 来进行时程实验,其中该系统的温度控制功能尤为有用。
由于他们针对每块板常常使用 3-4 个荧光团,因此他们现在每天能对大约 2-3 块板进行成像,但这具体取决于测定法。
图 1:转染带有 GFP 标签的 Affimer(绿色)并经磷酸化 ERK(橙色)染色的小鼠胚胎成纤维细胞。箭头突出了在表达 Affimer 的细胞中可明显观察到 pERK 染色减少。在 ImageXpress Pico 上于 20 倍放大倍率下获得的图像。