G 蛋白偶联受体 (GPCRs) 是药物发现研究 中最重要的治疗靶点之一。GPCRs 是膜定 位蛋白，在细胞信号通路中起重要作用。 当受 体 被 配 体 激 活 时，受 体 的 构 象被 改 变，激活细胞内的 G 蛋白。活性 G 蛋白有 可能诱导各种细胞内信使级联，包括钙离 子。 钙激活发光蛋白是检测受体介导的哺乳动 物细胞钙动员信号事件的重要工具。发光 蛋白的一个主要优点是在钙离子与腔肠素 - 发光蛋白复合物结合时立即发射闪光型发 光。 水 母 发 光 蛋 白 (aequorin) 检 测 的 背 景信号接近于零，导致高的信号与背景比 值。此外，腔肠素氧化发出的光不依赖于 光学激发，从而消除了自发荧光的问题。 现在有许多商业来源的发光蛋白表达细 胞 系，使 这 项 技 术更 容 易 获 得。这 些测 定方法在文献 1 中也有描述。 Molecular Devices 公司的 FlexStation 3 多功能微孔板读板机集成了移液系统，允 许实时测量基于荧光和发光细胞的检测方法。可在复合添加之前、期间和之后同时 监 测多 达 8 ( 96 孔 格 式 ) 或 16 (384 孔 格 式 ) 孔。可通过用户定义的分液高度、化 合物加液的速度、试剂源位置以及每次加 液的吸头选择，很容易对检测进行优化。 一次性移液吸头减少了加液和实验之间交 叉污染的机会，并减少了孔板的死体积 ( 与 注射器相比 )，节省了宝贵的试剂。 来 自 Molecular Devices 公 司 的 FLIPR Tetra 系统是市场上领先的监测 GPCR 和 离子通道活性的仪器，并代表了一种可靠 和 灵 活 的 HTS/uHTS 解 决 方 案， 用 于 在 药物发现过程中早期鉴定前导化合物。 FLIPR Tetra 系统 现在具有水母发 光蛋白 (aequorin) 选项可用，其中包括一种新的 ICCD 相机技术，优化后可用于荧光和发光 检测。此外，细胞悬浮系统使该系统能够 以 96、384 和 1536 孔 格式进 行贴壁和悬 浮细胞检测。 本应用文献提供了一个基本方案，用于使 用 FlexStation 3 读板机和带有 ICCD 像机 的 FLIPR Tetra 系统执行贴壁的水母发光 蛋白 (aequorin) 检 测。 这 两 种 仪 器 都 被 用来测定在不同细胞浓 度下，CHO mitoPhotina/H3 细 胞 中 IMETIT 的 浓 度 - 响 应。