研究蛋白质之间的相互作用 (PPI) 对于探索细胞功能及信号转导通路来说至关重要,目前有许多种方法来研究蛋白质之间的相互作用。 其中包括免疫共沉淀技术,以及基于荧光基础理论的荧光共振能量转移技术 (FRET),由于基于荧光的方法依赖于激光或高能氙闪灯作为光源来对样品的进行激发,因此往往容易产生光漂白和背景荧光等问题,从而大大限制了基于荧光方法的实用性。一种可以替代的方法,生物荧光共振能量转移 (BRET), 是利用荧光素酶催化的化学反应来产生光学 信号,由于这种方法无需外置光源激发作用, BRET 可以有效避免由于外来光源激发带来 的种种弊端。 来自于 Promega 的 Nano BRET 技术,其利 用了 Nano Luc 荧光素酶作为 BRET 检测供 体分子,标记有 HaloTag 荧光基团的蛋白 发射 618 nm 荧光波长作为受体分子。发生红移现象的受体分子减少了供体和受主荧光信光谱的光谱重叠作用 , 较替他 类型的 BRET 方法具有更好信噪比,如 Renilla 荧光素酶为供体,YFP 或GFP 作为受体的 BRET1 和 BRET2。本篇技术性短文介绍了如何利用 SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机进行 NanoBR ET 检测,分别介绍了如何利用仪器内置的检测模式进行 NanoBRET 检测以及如何利用具有更高灵敏度的 NanoBRET 卡盒进行相应检测, 如果利用更灵敏的检测卡盒可将定量检测下限提高四倍以上。