革兰氏阴性菌细胞壁内的脂多糖是强效的 内毒素，其进入人体内会引起急性炎症反 应[1]。因此，内毒素检测和定量是评估药 物、生物疗法和医疗器械是否安全供人类 使用的必要手段。为了被批准治疗使用，产 品必须满足 FDA 设置的内毒素检测范围[2]。 20 世纪 50 年代，人们发现鲎的血液在内 毒素存在的情况下会凝固。该凝血因子在 随后被证实是鲎变形细胞释放的一种蛋 白，可与内毒素发生反应。利用鲎血液中 的变形细胞溶解物 (LAL)，该凝血反应可 以在内毒素检测实验中被重复。最初，凝 血的形成是在检测试管中被观测到，作为 内毒素检测的一个判断方式。当研究人员 发现凝血形成伴随着浊度，该方法被应用 于动态比浊法，作为一种更加准确定量内 毒素的方法。随后，龙沙公司推出的基于 动态显色方式的 QCL LAL 检测试剂盒， 改进后利用溶液颜色变化，使其具有更高 的检测灵敏度 ( 低至 0.005 EU/mL ) 和更 强的抗外部干扰能力。 在内毒素存在的情况下，一种酶导致从合 成底物中释放对硝基苯胺，产生黄色 ( 图 1 )。该颜色可以在 405 nm 处使用分光光 度计检测。在 405 nm 处，OD 比基线 ( 开 始时间 ) 增加 0.2 个吸光度单位所需的时 间与微孔板孔内毒素的含量成反比。通过 建立一条到达固定吸光度值的时间与已知 内毒素浓度标准样品的标准曲线，这样研 究人员可以计算他们样本的内毒素水平。 在本篇应用文章中，我们展示了如何利用 Molecular Devices 微孔板读板机和 SoftMax Pro 软件针对龙沙公司的动力学 QCL LA L 试剂盒进行的检测实验，提供了 相应内毒素定量检测方法的完整解决方 案。
