在这篇应用文献中，我们展示了如何用 SpectraMax i3、SpectraMax Paradigm 和SpectraMax M5e多功能微孔板读板机 进行可靠的、高通量的HTRF检测，并具 有完美的Z’因子和高重复性的EC50值。 HTRF是Cisbio Bioassays公司开发的一 项检测生物分子相互作用的多用途技术 1。这项技术结合了荧光共振能量转移 (FRET)技术和时间分辨(TR)荧光测定，可 消除短寿命的背景荧光。这一检测使用供 体和受体荧光基团。当供体和受体彼此足 够接近时，能量源(如氙闪灯)激发供体使 能量转移到受体上，受体发射出特定波长 的荧光。 HTRF使用4种专门的荧光基团，能够组合 成一对供体-受体TR-FRET基团。供体为铕 (Eu3+)的穴状化合物和铽(Lumi4-Tb)的 穴状化合物，其长寿命荧光可以用于时间 分辨荧光检测中1。两种受体分别为XL665 和d2，用于HTRF检测中。这两种受体的 激发光谱均与HTRF供体的发射光谱重 叠。每个受体的发射峰都在665nm且供体 在这一范围内没有发射光或发射光很弱。 最初的HTRF受体XL665，是一种从红藻中 纯化出的藻胆蛋白色素。第二代受体d2是 一种经过修饰的别藻蓝蛋白，比XL665小 100倍且可以减少可能在XL665检测中出 现的空间位阻问题。HTRF cAMP HiRange试剂盒能够在细胞样 品中对环腺苷酸(cAMP，环腺苷3’，5’一 磷酸)进行定量。cAMP在G蛋白偶联受体 (GPCR)信号转导中是一种关键的第二信 使。当配体结合到GPCR，构想改变就会 发生，激活受体接着激活G蛋白。进一步 的信号转导取决于激活的G蛋白类型。Gs 的激活导致腺苷酸环化酶调控cAMP的上 调。细胞中产生的自由cAMP与d2-标记的 cAMP竞争性结合抗cAMP穴状化合物抗体，因此，细胞内cAMP的增加会导致 FRET降低，侦测到的665nm荧光发射也 会下降