血小板为体积小，无细胞核的血细胞，其 通过在血管损伤处聚集形成血栓来减少失 血达到止血的作用。然而，当血小板对血 管损伤处理不当时就可能发生血栓性疾 病，如心梗和缺血性中风等。血栓形成主 要有三步：首先是粘附(血小板结合到受损 血管内皮处暴露在外的基质蛋白)，其次是 激活(相关受体介导的变化如细胞形状的改 变和化学信使的分泌)，最后是聚集(血小 板之间的粘附)。在最后一步中，血小板起 初由胶原蛋白经糖蛋白VI受体(GPVI)激 活，后经多种分泌出来靶向G蛋白偶联受 体(G-protein coupled receptors，GPCRs) 的 激 动 剂 如 二 磷 酸 腺 甙 ( A d e n o s i n e diphosphate， ADP)和血栓素A 2 (Thromboxane A2 ， TxA2 )进一步激活。 这些GPCRs通过结合血小板中磷脂酶C (Phospholipase C, PLC)亚型PLCß 或PLCγ2 引起钙离子(Calcium，Ca2+)从致密管道系 统(Dense tubular system，DTS)释放到 胞浆中。DTS中钙离子的消耗则会通过钙 池调控的钙进入机制引发细胞外钙离子的 涌入。由上述机制介导的胞浆Ca2+浓度的 上升是血小板所有功能，包括粘附，形状 改变和聚集的基础。因此，深入了解不同 的激动剂在正常和疾病情况下如何调控钙 离子浓度的变化会协助我们进一步开发新 的，更为安全的抗血栓药物。 在此应用指南中，我们展示如何在微孔板 体系中使用钙离子高亲和力荧光指示剂 Fura-2, AM进行简便，可行的原代人血小 板钙流的检测。同时，我们证明基于96-孔 半孔板的微型化实验体系下利用FlexStation 3多功能酶标仪灵活的液体转移能力可做 到迅速，可靠的激动剂EC5 0值和拮抗剂 IC50值计算。
