FlexStation 3 多功能微孔读板机整合了 高灵敏光路、液体转移和温度控制，使之成 为理想的动力学和基于细胞的荧光检测仪 器，这些检测包括如细胞内钙流、膜电势和 细胞内 pH。 从细菌到特殊神经元，钙离子 (Ca2+) 都是 细胞中最为常见的信号转导元件。测量细 胞内阳离子浓度的变化，例如 Ca2+，对于理 解许多细胞过程的机制很重要。一系列事 件，如受体 - 配体相互作用，介导细胞内钙 ([Ca2+]i ) 水 平 从 ~100 nM 升 高 到 ~1 μM， 这可能触发许多事件，包括突触递质释放、 肌肉收缩、激素分泌、细胞运动或凋亡。 用单波长染料 ( 如 Fluo-3 和 FLIPR Calcium Assay 试 剂 ) 或 者 双 波 长 比 例 指 示 剂 如 Fura-2 测定 ([Ca2+]i ) 的变化。对于单波长 染料，荧光强度取决于 Ca2+ 浓度，而比率 指示剂具有与 Ca2+ 浓度成正比的光谱位 移 ( 图 1 )。最 为 常 见 的 单 波 长 指 示 剂 如 Fluo-3 由可见光激发而最常见的双波长染 料 (Fura-2) 则需要紫外光。2 FlexStation 3 读板机包含可调的氙灯光源 和双扫描单色器，允许使用双波长染料进 行功能性细胞检测。 虽然可见光激发的 Ca2+ 指示剂提供了一些 优势，如减少样品自发荧光的干扰和染料 的更高吸光度 ( 允许使用低浓度染料 )，然 而比率法染料比传统的单波长指示剂有几 个突出的优点。使用 340/380 nm 比例激发 的 Fura-2 优点如下： • 信号不依赖于染料浓度、光照强度或光 程• 最小化染料负载不均、染料泄漏和光漂 白影响；检测通常可以在 1 小时内进行， 而不会有明显的荧光损失 • 获得更稳定的信号和更好的信噪比以提 高灵敏度 • 使细胞内 Ca2+ 浓度的精确测量成为可能 另一种方法是 Molecular Devices 公司的 一系列“ 免洗 ”试剂，例如 FLIPR Calcium Assay 试 剂。与 传 统 的 Ca2+ 指 示 剂 相 比， 也带来了一些潜在的优势。“ 免洗 ”试剂可 以减少常规检测方案中的这些问题： • 细胞在孔板洗涤过程中的损失 • 洗涤后细胞的应答 ( 能力 ) 降低 • 洗涤缓冲液剩余体积的差异，导致测试 化合物浓度的差异 • 添加测试化合物后荧光的下降（ 由于残 留细胞外染料的稀释 ） 在本篇应用说明中，我们展示了单波长和 双 波 长 Ca2+ 指 示 剂 在 FlexStation 3 读 板 机上的使用以及均相检测系统的可能的优 势。